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想知道多肽合成儀是如何運行的那你可找對了

更新時間:2021-05-25點擊次數(shù):1033

  多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理,在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序不斷添加、反應(yīng)、合成,操作Z終得到多肽載體。固相合成法,大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。

  下面讓我們一起來了解一下多肽合成儀的原理及步驟吧

  首先將所要合成肽鏈的羥末端氨基酸的羥基,以共價鍵的結(jié)構(gòu)和一個不溶性的高分子樹脂相連,然后以此結(jié)合固相載體上的氨基酸作為氨基組份,經(jīng)過脫去氨基保護基并同過量的活化羧基組分反應(yīng),接長肽鏈。

  重復(縮合→洗滌→去保護→中和及洗滌→下一輪縮合)操作,達到所要合成的肽鏈長度,Z后將肽鏈從樹脂上裂解下來,經(jīng)過純化等處理,即得所要的多肽。

  多肽合成中α-氨基用BOC(叔丁氧羰基)保護的稱為BOC固相合成法,α-氨基用FMOC(9-芴甲氧羰基)保護的稱為FMOC固相合成法。

  多肽合成步驟

  1、樹脂的選擇及氨基酸的固定

  用于多肽合成的高分子的載體主要有3類:交聯(lián)聚苯乙烯;聚酰胺;聚乙烯乙二醇脂類樹脂。氨基酸的固定主要是通過保護的氨基酸的羧基同樹脂的反應(yīng)基團之間形成共價鍵來實現(xiàn)。

  2、氨基、羧基、側(cè)鏈的保護及脫除

  要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽,需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護,同時對氨基酸側(cè)鏈上的活性基團也要保護,反應(yīng)完成后再將保護基團除去。

  近年來,F(xiàn)MOC合成法得到了廣泛的應(yīng)用。羧基通常用形成酯基的方法進行保護,甲酯和乙酯是逐步合成中保護羧基的常用方法。

  3、成肽反應(yīng)

  固相中的成肽反應(yīng)一般是將兩個相應(yīng)的氨基被保護的氨基酸,及羧基被保護的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵,要形成酰胺鍵,經(jīng)常用的手段是將羧基活化,變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的縮合劑(如碳二亞氨)形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。

  4、裂解及合成肽鏈的純化

  BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護基,F(xiàn)MOC法直接用TFA,有時根據(jù)條件不同,其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護方法也被采用。合成肽鏈進一步的精制、分離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細管電泳等。